ISSN 2953-6367  
http://revistainvestigo.com  
Octubre 2026  
Vol. 7 No. 21, PP. 208-221  
https://doi.org/10.56519/3bp0e247  
EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON NANOCOMPLEJOS DE  
COLESTEROL-METIL-Β-CICLODEXTRINA EN LA CALIDAD  
SEMINAL OVINA  
EFFECT OF SUPPLEMENTATION WITH CHOLESTEROL-  
METHYL-Β-CYCLODEXTRIN NANOCOMPLEXES ON SEMEN  
QUALITY  
José Luis Requena Lozano1, Marlon Sebastián Rivadeneira Romero2, Manuel Esteban  
Maldonado Cornejo3, Juan Carlos Alvarado Alvarado4, Andrés Leonardo Moscoso Piedra5  
{jose.requena.74@est.ucacue.edu.ec1, marlon.rivadeneira.14@est.ucacue.edu.ec2, mmaldonadoc@ucacue.edu.ec3  
jalvaradoa@ucacue.edu.ec4, amoscosop@ucacue.edu.ec5}  
Fecha de recepción: 15/08/2026  
/ Fecha de aceptación: 08/10/2026  
/ Fecha de publicación: 14/10/2026  
RESUMEN: La criopreservación de semen constituye una biotecnología para la conservación  
de recursos genéticos ovinos, donde las fases críticas de congelación y descongelación inducen  
un severo estrés oxidativo (EO) y la acumulación de especies reactivas de oxígeno (ROS),  
desencadenando alteraciones irreversibles en la arquitectura lipídica de la membrana  
plasmática espermática, debido a su alta proporción de ácidos grasos poliinsaturados (PUFA) y  
baja concentración endógena de colesterol propia de la especie. Para mitigar este daño, la  
adición de nanocomplejos de colesterol-metil-β-ciclodextrina (CLC) en los diluyentes  
comerciales representa una alternativa para preservar la viabilidad celular. Esta investigación  
determinó el efecto de CLC en sustitución de la yema de huevo dentro del diluyente Triladyl,  
evaluando su impacto sobre la calidad espermática post-descongelación. Se recolectaron cinco  
eyaculados de un carnero de la raza Katahdin, ajustándose a una concentración de 50×10⁶  
espermatozoides por dosis. Las muestras se dividieron en cuatro grupos: uno de control y tres  
tratamientos suplementados con 1 mg, 2 mg y 3 mg de CLC. Tras la criopreservación, el semen  
fue evaluado mediante el sistema CASA, tinción de Eosina-Nigrosina, el test HOST y la  
fluoresencia MitoTracker Green. Los resultados evidenciaron que la suplementación con 1 mg  
de CLC brindó una protección superior a la membrana espermática, además de proteger la  
1Carrera de Medicina Veterinaria, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Cuenca – Ecuador, https://orcid.org/0009-  
0009-8860-3693; +593997639542  
2Carrera de Medicina Veterinaria, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Cuenca – Ecuador, https://orcid.org/0009-  
0000-4548-9186; +593991286898  
3Carrera de Medicina Veterinaria, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Cuenca – Ecuador, https://orcid.org/0000-  
0002-7240-179X; +593999023022  
4Carrera de Medicina Veterinaria, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Cuenca – Ecuador, https://orcid.org/0000-  
0002-1507-2280; +593999388991  
5Carrera de Medicina Veterinaria, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad de Cuenca – Ecuador, https://orcid.org/0000-  
0002-4017-0165; +593984688499  
208  
Revista Científica Multidisciplinaria InvestiGo  
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Cel: +593 97 911 9620  
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EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON NANOCOMPLEJOS DE COLESTEROL-METIL-Β-CICLODEXTRINA EN LA CALIDAD SEMINAL  
OVINA  
actividad mitocondrial, mejorando así su integridad funcional, mientras la progresividad sufrió  
alteraciones, se mantuvo estable respecto al control. Se concluye que el uso de nanocomplejos  
de CLC optimiza la criopreservación seminal ovina, ofreciendo una alternativa biosegura frente  
al uso de yemas de huevo.  
Palabras clave: colesterol-metil-β-ciclodextrina (CLC), criopreservación, semen ovino, estrés  
oxidativo, calidad espermática  
ABSTRACT: Cryopreservation of sheep semen constitutes an essential livestock  
biotechnology for the conservation and dissemination of genetic resources of high zootechnical  
value within sustainable production systems. However, the critical phases of thermal descent,  
freezing, and thawing induce severe oxidative stress (EO) and the accumulation of reactive  
oxygen species (ROS), triggering irreversible alterations in the lipid architecture of the sperm  
plasma membrane due to its high proportion of polyunsaturated fatty acids (PUFAs) and low  
endogenous cholesterol concentration. To mitigate this cryogenic damage, the addition of  
methyl-β-cyclodextrin-cholesterol nanocomplexes (CLC) in commercial diluents represents a  
superior biotechnological alternative to stabilize the membrane and preserve cell viability. The  
purpose of this research was to determine the optimal concentration of (CLC) as a substitute  
for egg yolk within the Triladyl diluent, evaluating its impact on post-thaw sperm quality. Five  
ejaculates from a Katahdin ram were collected using an artificial vagina, adjusted to a  
concentration of 50 × 10⁶ sperm per dose. The samples were divided into four groups: one  
control and three treatments supplemented with 1 mg, 2 mg, and 3 mg of (CLC). After  
cryopreservation in liquid nitrogen, the semen was evaluated using the computerized CASA  
system, Eosin-Nigrosin staining, the HOST test, and the fluorescent probe MitoTracker Green.  
The results showed that supplementation with 1 mg of (CLC) provided superior protection to  
the sperm membrane against osmotic and thermal variations, significantly improving its  
functional integrity and flagellar beat frequency, while the parameters of overall viability and  
mitochondrial activity remained stable compared to the control. It is concluded that the use of  
(CLC) nanocomplexes optimizes ovine semen cryopreservation, offering a biosecure alternative  
to the use of avian-origin yolks.  
Keywords: methyl-β-cyclodextrin-cholesterol (CLC), cryopreservation, ovine semen, oxidative  
stress, sperm quality  
INTRODUCCIÓN  
La criopreservación del semen es una de las principales biotecnologías reproductivas  
implementadas para la conservación de germoplasma, el mejoramiento genético y la difusión de  
material reproductivo de alto valor mediante programas de inseminación artificial. Su aplicación  
ha permitido preservar el material genético de sementales sobresalientes, lo que ha contribuido  
al incremento de la eficiencia reproductiva de los sistemas de producción ovina. Sin embargo, el  
éxito de esta técnica depende en gran medida de la capacidad de los espermatozoides para  
mantener su funcionalidad después de los procesos de congelación y descongelación, los cuales  
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OVINA  
generan alteraciones estructurales y metabólicas lo que consecuentemente considerablemente  
la fertilidad y viabilidad del semen criopreservado (1,2).  
Los espermatozoides poseen una limitada capacidad antioxidante y reducida cantidad de  
citoplasma, motivos por los cuales resultan altamente susceptibles al daño oxidativo ocasionado  
durante el proceso de congelación y descongelación. Por su parte, durante el proceso de  
criopreservación los espermatozoides son sometidos a cambios extremos de temperatura y  
presión osmótica que modifican la organización de los fosfolípidos de la membrana plasmática,  
contribuyendo a la formación de cristales de hielo y aumentan la producción de especies reactivas  
de oxígeno (ROS). En consecuencia, estas alteraciones desencadenan estrés oxidativo,  
peroxidación lipídica, al igual que alteraciones en las proteínas, mitocondrias, ADN espermático y  
consecuentemente la disminución de la motilidad, viabilidad, integridad de membrana y la  
capacidad fecundante de las células espermáticas (3,4).  
Por su parte, uno de los principales factores predisponentes de la susceptibilidad espermática, en  
comparación con otros animales domésticos, radica en la composición lipídica de la membrana  
plasmática del espermatozoide al igual que presenta una menor relación entre el colesterol y los  
fosfolípidos tomando en consideración su elevado contenido de ácidos grasos poliinsaturados,  
características de esta especie, que incrementan la fluidez de la membrana y reducen su  
estabilidad frente al choque térmico. En este sentido la supervivencia celular, posterior a la  
descongelación, depende del proceso de criopreservación proceso donde ocurre una pérdida  
progresiva de colesterol, lo que favorece a la formación de poros e incrementa la permeabilidad  
celular, facilitando la afluencia anómala de calcio, los procesos de criocapacitación y reacción  
acrosomal prematura (5).  
Durante los últimos años se han desarrollado diversas técnicas relacionadas con la estabilización  
de la membrana plasmática antes del proceso de congelación. Entre aquellos hallazgos data la  
utilización de nanocomplejos de colesterol-metil-β-ciclodextrina (CLC) debido a su capacidad para  
transportar colesterol hacia la bicapa lipídica del espermatozoide. Por su parte, el colesterol-  
metil-β-ciclodextrina se caracteriza por su una cavidad hidrofóbica que permite encapsular  
moléculas lipofílicas como el colesterol y transferirlas eficientemente hacia la membrana celular.  
Por consiguiente, la estabilidad estructural de la membrana aumenta, reduce la extracción de  
colesterol durante el enfriamiento y mejora la resistencia de los espermatozoides frente al estrés  
térmico y osmótico de la criopreservación (6).  
Previas investigaciones realizadas en diferentes especies domésticas han demostrado que la  
suplementación con complejos colesterol–ciclodextrina incrementa significativamente la  
criotolerancia espermática. Tomando en consideración que el uso de colesterol mediante estos  
nanocomplejos mejora la estabilidad de la membrana plasmática, disminuye el daño oxidativo, y  
a su vez preservando el potencial de membrana mitocondrial y la producción de ATP necesaria  
para el movimiento flagelar. Brindando así mejoras significativas en parámetros relacionados con  
la motilidad total, motilidad progresiva, integridad de membrana, viabilidad celular y  
funcionalidad mitocondrial tras de su descongelación. De igual manera, estudios previos  
evidencian mejoras en aquellos sementales clasificados como "malos congeladores", cuya calidad  
seminal se ve comprometida durante la criopreservación (7).  
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OVINA  
En lo que concierne al desarrollo de softwares, el Análisis de Semen Asistido por Computadora  
(CASA), ha optimizado el proceso de evaluación de los parámetros mencionados, al igual que la  
precisión relacionada con el análisis de la motilidad y la cinética espermática, reduciendo así la  
variabilidad inherente frente a las evaluaciones subjetivas. Por su parte, el uso de las pruebas  
funcionales como la tinción de eosina–nigrosina, el test hiposmótico (HOST) y la utilización de  
sondas fluorescentes como MitoTracker Green permiten valorar la viabilidad celular, la  
funcionalidad de la membrana plasmática y el potencial metabólico mitocondrial,  
proporcionando así una evaluación integral de la calidad seminal post-descongelación (8).  
Por otra parte, es indispensable resaltar que la variabilidad con respecto a las concentraciones  
óptimas de colesterol-metil-β-ciclodextrina utilizadas en los protocolos de criopreservación  
influenciadas principalmente por factores predisponentes como son: la raza, el diluyente  
empleado, la concentración espermática, las condiciones ambientales, al igual que el tiempo de  
incubación previo a la congelación, lo cual altera la respuesta de los espermatozoides a la  
suplementación lipídica. En este sentido, aún no se han determinado protocolos universales que  
garanticen la calidad seminal post – descongelación en ovinos bajo condiciones de producción y  
laboratorio empleadas en Ecuador (9).  
En este contexto, la presente investigación tiene como objetivo evaluar el efecto de tres dosis de  
complejos de colesterol–metil-β-ciclodextrina como sustituto de la yema de huevo en el diluyente  
Triladyl sobre la calidad seminal posdescongelación en ovinos, mediante el análisis de la  
motilidad, la cinética espermática, la viabilidad celular y la funcionalidad de la membrana  
plasmática.  
MATERIALES Y MÉTODOS  
La presente investigación se realizó en el Laboratorio de Reproducción Animal de la Facultad de  
Ciencias Agropecuarias de la Universidad Católica de Cuenca, ubicado en el cantón Cuenca,  
provincia del Azuay, Ecuador. Para el estudio se hizo uso de semen de un carnero macho de raza  
Kathadin, de tres años de edad y fertilidad comprobada, mantenido bajo un modelo de  
producción intensivo. La alimentación del ejemplar se basó en un sistema de ración total  
mezclada (TMR, por sus siglas en inglés: Total Mixed Ration), lo que garantizó el suministro  
balanceado de los requerimientos nutricionales durante el período experimental.  
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Figura 1. Diseño de la investigación.  
La investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto de la suplementación con nanocomplejos  
de colesterol-metil-β-ciclodextrina (CLC) sobre la calidad seminal post-descongelación en ovinos,  
empleando como tratamiento testigo un diluyente convencional a base de Triladyl y yema de  
huevo. En este contexto, se utilizó semen de un carnero Katahdin de tres años, procedente de la  
granja Gañanzol de la Universidad Católica de Cuenca, con un peso aproximado de 100 kg y  
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condición corporal de 3,5/5. Se realizaron cinco colectas mediante un diseño de bloques  
completos al azar (DBCA), considerando cada colecta como bloque. Cada eyaculado se dividió en  
cuatro fracciones asignadas aleatoriamente a los tratamientos. Cada fracción constituyó una  
unidad experimental, para un total de 20. Se evaluó una pajuela por tratamiento y colecta,  
sumando 20 pajuelas.  
Por su parte, la metodología comprendió las fases de campo y laboratorio (figura 1). El semen se  
recolectó con vagina artificial IMV Technologies a 40–45 °C y se transportó protegido de la luz  
directa y los cambios térmicos (10).  
Se evaluaron volumen, color, motilidad masal, motilidad individual y concentración. Se aceptaron  
eyaculados sin contaminación visible, con motilidad individual ≥70 %, motilidad masal ≥3/5 y  
concentración ≥2 × 10⁹ espermatozoides/ml. La motilidad masal se observó a 10× y la  
concentración mediante fotómetro SDM1 (Minitube), configurado para ovinos (11).  
El complejo colesterol–metil-β-ciclodextrina (CLC) se preparó mezclando 0,45 ml de una solución  
de colesterol en cloroformo, a 200 mg/ml, con 1 g de metil-β-ciclodextrina disuelta en 2 ml de  
metanol, equivalentes a 90 mg de colesterol por gramo de ciclodextrina. Los solventes se  
evaporaron con nitrógeno; el material se secó durante 24 horas y almacenó a 22 °C. Se  
dispersaron 50 mg de CLC en 1 ml de TALP a 37 °C mediante vórtex (12).  
T0 contenía Triladyl, yema y agua ultrapura, sin CLC. T1, T2 y T3 utilizaron 1 ml de Triladyl y 3 ml  
de agua ultrapura, sin yema, incorporando respectivamente 1, 2 y 3 mg de CLC por 50 × 10⁶  
espermatozoides, equivalentes a 20, 40 y 60 µl de solución. Tras equilibrar los componentes a 37  
°C e incubar durante 15–20 minutos, se envasaron pajuelas de 0,25 ml con 50 × 10⁶  
espermatozoides (13).  
La congelación se realizó con el equipo CL5500 Freezcontrol (Minitube), con un descenso de 20 a  
−50 °C en aproximadamente 90 minutos, seguido de una caída rápida hasta aproximadamente  
−143 °C y almacenamiento a −196 °C en nitrógeno líquido. A las 24 horas se descongelaron las  
pajuelas a 37 °C durante 40 segundos con MT 30/54 (Minitube), manteniéndolas sobre una  
platina térmica Biotherm (14).  
Se utilizó el sistema CASA Microptic SCA Evolution, con software SCA VET 6.6.64. Se analizaron 5  
µl de semen mediante un objetivo de contraste de fases de 10×, manteniendo la temperatura a  
37 °C. Se capturaron 50 imágenes por segundo durante un segundo por campo, examinando cinco  
campos y al menos 100 espermatozoides. Se registraron PR, NP, IM, VCL, VAP, VSL, LIN, STR, ALH  
y BCF, con umbrales VSL ≥45 µm/s para progresivos y VCL <5 µm/s para inmóviles.  
La viabilidad se evaluó con eosina–nigrosina. Para HOST, se mezclaron 20 µl de semen con 100 µl  
de solución hiposmótica, incubando 45 minutos a 37 °C; se consideraron positivas las células con  
cola enrollada o curvada. Para MitoTracker Green (Invitrogen), se mezclaron 20 µl de semen con  
80 µl de solución, incubando 15 minutos a 37 °C en oscuridad. La lectura de fluorescencia se  
realizó dentro de los 10 minutos siguientes a la incubación. Ambas pruebas incluyeron 100  
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espermatozoides a 400×; mediante MitoTracker se registraron los porcentajes con y sin  
fluorescencia verde en la pieza intermedia (15).  
El ANOVA incorporó tratamiento y colecta. Se evaluaron normalidad de residuos mediante  
Shapiro–Wilk y homogeneidad de varianzas mediante Levene. Cuando se detectaron diferencias  
significativas, las medias se compararon mediante Tukey, con significancia de 0,05. Los resultados  
se expresaron como medias y desviaciones estándar.  
RESULTADOS  
En contraste de la calidad seminal post-descongelación, la misma presentó respuestas que  
difieren según el parámetro evaluado. Tomando en consideración que se observaron diferencias  
entre tratamientos en HOST, al igual que la eosina–nigrosina, marcación mitocondrial, linealidad  
y rectitud, mientras que las categorías de motilidad no mostraron diferencias significativas. En lo  
que respecta a los resultados, estos corresponden a cinco colectas del mismo reproductor,  
tomando en consideración que se realizaron cinco observaciones por tratamiento, y se expresan  
como media ± desviación estándar. Las dosis de 1, 2 y 3 mg de CLC corresponden a cada 50 × 10⁶  
espermatozoides.  
Figura 2. Funcionalidad de la membrana plasmática y viabilidad espermática posdescongelación. Valores  
expresados como media ± desviación estándar.  
En cuanto a la funcionalidad de la membrana plasmática en términos de HOST hubo variaciones  
entre diferentes tratamientos (p=0.001). La dosis de 1 mg fue la que obtuvo el mayor porcentaje  
de respuesta positiva, el cual fue del 78.00 ± 1.58%, en comparación con el grupo control que  
tuvo un 63.80 ± 3.27%. La variación entre ambos fue de 14.20 puntos porcentuales. Considerando  
que las dosis de tratamiento de 2 y 3 mg dieron un 73.20 ± 2.39% y 72.40 ± 2.07% respectivamente  
estas fueron valores intermedios en comparación con el grupo control y la dosis de tratamiento  
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de 1 mg. De la distribución de Tukey la dosis de tratamiento de 1 mg difiere significativamente  
del resto de los tres grupos ya que las dosis de tratamiento de 2 y 3 mg comparten la misma letra.  
La viabilidad evaluada mediante eosina–nigrosina también presentó diferencias globales (p =  
0,001). El mayor valor numérico correspondió a 1 mg, con 73,40 ± 2,07 %, seguido de 2 mg, con  
71,60 ± 1,52 %, y 3 mg, con 70,20 ± 1,30 %. El testigo registró 68,40 ± 1,14 %. Las diferencias  
numéricas respecto al testigo fueron de 5,00, 3,20 y 1,80 puntos porcentuales, respectivamente.  
Así, las medias de viabilidad siguieron el mismo orden que HOST, aunque con una separación  
menor entre los cuatro tratamientos.  
Figura 3. Porcentajes de espermatozoides progresivos, no progresivos e inmóviles. Valores expresados como media  
± desviación estándar.  
En cuanto respecta al porcentaje de espermatozoides progresivos no se detectaron diferencias  
significativas (p = 0,075). Tomando en consideración que el testigo mostró la media más alta, con  
28,34 ± 16,61 %, en comparación con 1, 2 y 3 mg alcanzaron 13,08 ± 5,68 %, 17,25 ± 4,87 % y  
14,81 ± 2,73 %, respectivamente. El grupo control mostró el porcentaje promedio más alto de  
28.34 ± 16.61%, mientras que los grupos de 1,2 y 3 mg mostraron porcentajes de 13.08 ± 5.68%,  
17.25 ± 4.87% y 14.81 ± 2.73% respectivamente. En cuanto a la motilidad no progresiva el grupo  
de 2 mg mostró el porcentaje más alto de 49.65 ± 15.67%, seguido por el grupo de 3 mg con un  
46.32 ± 9.70% y el grupo control con un 44.32 ± 15.53%. Por el contrario, el grupo de 1 mg tuvo  
un porcentaje de 33.91 ± 13.55%. No hubo diferencias significativas en la comparación global  
(p=0.331), por lo que el orden de estas medias se corresponde a una descripción de los valores  
observados.  
La proporción de espermatozoides inmóviles fue de 27,61 ± 17,12 % en el testigo, 53,00 ± 18,69  
% con 1 mg, 33,11 ± 20,05 % con 2 mg y 38,87 ± 12,21 % con 3 mg. Pese a la mayor media  
registrada con 1 mg, las diferencias no alcanzaron significancia estadística (p = 0,155). Las  
desviaciones estándar reflejaron una dispersión considerable, especialmente en esta categoría.  
En las tres variables de motilidad, todos los tratamientos compartieron la letra «a». Estos  
resultados no demostraron una mejora de la motilidad asociada a las formulaciones con CLC, ni  
permiten afirmar equivalencia entre ellas.  
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EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON NANOCOMPLEJOS DE COLESTEROL-METIL-Β-CICLODEXTRINA EN LA CALIDAD SEMINAL  
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Figura 4. Espermatozoides con marcación mitocondrial detectable y sin marcación detectable. Valores expresados  
como media ± desviación estándar.  
El porcentaje de espermatozoides con fluorescencia verde detectable en la pieza intermedia,  
registrado como MIT, presentó diferencias globales entre tratamientos (p = 0,001). El testigo  
alcanzó 75,20 ± 3,11 %, mientras que las dosis de 1, 2 y 3 mg registraron 80,00 ± 1,58 %, 83,80 ±  
0,84 % y 86,60 ± 1,14 %, respectivamente. Las medias aumentaron de manera ordenada con las  
dosis evaluadas. El mayor porcentaje de células con marcación positiva se observó en el  
tratamiento de 3 mg.  
En comparación con el testigo, las diferencias numéricas fueron de 4,80 puntos porcentuales para  
1 mg, 8,60 para 2 mg y 11,40 para 3 mg. Entre las dosis consecutivas, el incremento de la media  
fue de 3,80 puntos porcentuales al pasar de 1 a 2 mg y de 2,80 al pasar de 2 a 3 mg. Estas  
diferencias describen la magnitud observada en la figura 3, sin establecer por sí mismas la  
significancia de cada comparación entre pares.  
La categoría Sin MIT presentó el comportamiento inverso. El testigo registró 24,80 ± 3,11 % de  
células sin fluorescencia detectable, frente a 20,00 ± 1,58 %, 16,20 ± 0,84 % y 13,40 ± 1,14 % con  
1, 2 y 3 mg, respectivamente. También se reportó una diferencia global para esta variable (p =  
0,001). En cada tratamiento, MIT y Sin MIT sumaron el 100 %, por lo que representan categorías  
complementarias de la misma evaluación. Los resultados expresan la proporción de células  
clasificadas según su marcación con MitoTracker Green; no constituyen mediciones directas de  
producción de ATP ni de capacidad fecundante.  
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EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON NANOCOMPLEJOS DE COLESTEROL-METIL-Β-CICLODEXTRINA EN LA CALIDAD SEMINAL  
OVINA  
Figura 5. Índices de linealidad y rectitud de la trayectoria espermática. Valores expresados como media ±  
desviación estándar.  
El índice de linealidad (LIN) presentó diferencias significativas entre tratamientos (p = 0,017). El  
testigo obtuvo la mayor media, con 56,25 ± 13,91 %, seguido del tratamiento de 2 mg, con 43,99  
± 2,43 %. Las dosis de 1 y 3 mg registraron 39,65 ± 6,83 % y 40,56 ± 3,11 %, respectivamente.  
Frente al testigo, las reducciones numéricas fueron de 16,60 puntos porcentuales con 1 mg, 12,26  
con 2 mg y 15,69 con 3 mg.  
La agrupación de Tukey indicó que el testigo, identificado con la letra «b», difirió de los  
tratamientos de 1 y 3 mg, identificados con «a». La dosis de 2 mg compartió ambas letras y no  
presentó diferencias significativas respecto a ninguno de esos grupos. De este modo, su media  
ocupó una posición intermedia, sin que ello permita atribuirle una superioridad estadística frente  
a las otras dosis de CLC.  
El índice de rectitud (STR) mostró un patrón semejante, con diferencias globales (p = 0,016). El  
testigo alcanzó 74,46 ± 5,04 %, mientras que los tratamientos de 1, 2 y 3 mg registraron 67,96 ±  
3,11 %, 69,94 ± 1,00 % y 68,82 ± 0,49 %, respectivamente. La comparación de Tukey volvió a  
diferenciar al testigo de las dosis de 1 y 3 mg; el tratamiento de 2 mg compartió grupo con los  
restantes. En ambos índices, las mayores medias correspondieron al testigo. Dentro de los grupos  
con CLC, 2 mg presentó los valores numéricos más altos, aunque sin diferencias significativas  
frente a 1 y 3 mg.  
DISCUSIÓN  
El análisis de los resultados muestra que las reacciones al cholesterol-metil-β-ciclodextrina (CLC)  
varían dependiendo de los parámetros utilizados para describir las respuestas. La dosis de 1 mg  
presenta el porcentaje máximo de reacción y el máximo valor medio de viabilidad, mientras que  
la dosis de 3 mg muestra el porcentaje más alto de células con tinción mitocondrial visible. Sin  
embargo, estos parámetros no están acompañados de una mejora significativa en la motilidad.  
Estas contradicciones nos impiden considerar la calidad seminal como una respuesta consistente  
al aumento de la dosis.  
La reacción del HOST está de acuerdo con una mayor protección de la funcionalidad de la  
membrana plasmática. La diferencia de 14,20 puntos porcentuales entre la dosis de 1 mg y el  
grupo control corresponde en términos generales a la protección de la membrana reportada por  
217  
EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON NANOCOMPLEJOS DE COLESTEROL-METIL-Β-CICLODEXTRINA EN LA CALIDAD SEMINAL  
OVINA  
Batissaco et al (6). Como precedente para este experimento Mocé et al . observan que el  
tratamiento con CLC conduce a un aumento del colesterol en los espermatozoides de oveja (14).  
La evaluación con eosina–nigrosina complementa esta observación, al mostrar su mayor media  
de viabilidad con 1 mg. No obstante, HOST y viabilidad no representan mediciones equivalentes:  
la primera prueba registra la respuesta al medio hipotónico y la segunda clasifica las células según  
la entrada del colorante. Su coincidencia descriptiva favorece una lectura conjunta de la  
conservación celular, pero no demuestra que todos los tratamientos con CLC superen  
estadísticamente al testigo en viabilidad.  
Contrarrestando el hecho de que no existen diferencias notables entre los espermatozoides  
progresivos, no progresivos e inmóviles se hacen evidentes los avances en cuanto a la motilidad  
en algunos otros protocolos que utilizan el CLC. Batissaco et al. destacan los efectos positivos  
particularmente en las muestras de baja y media crio preservación mientras que las reacciones  
son diferentes en las muestras de alta crio preservación (6).Esto resulta útil para explicar la  
ausencia de cualquier reacción a pesar de que las ovejas que se están examinando no pertenecen  
a estas categorías ya que no se puede afirmar a partir de los datos disponibles.  
En lo que refiere a la marcación mitocondrial muestra un patrón diferente: la proporción de  
células MIT aumenta desde 75,20 % en el testigo hasta 86,60 % con 3 mg. Este hallazgo indica una  
mayor frecuencia de fluorescencia detectable en la pieza intermedia bajo el procedimiento  
empleado. Por su parte, en lo que refiere a su alcance debe mantenerse en ese nivel, porque la  
clasificación positiva o negativa no cuantifica directamente producción de ATP, potencial de  
membrana ni eficiencia energética.  
Por su parte, la cinética de los espermatozoides la cual representa el mejor medio de LIN y STR  
está relacionada con el control y difiere de 1 y 3 mg. Esto indica que los resultados más positivos  
en la prueba de las membranas no garantizan un nivel más alto de linealidad o de dirección. La  
falta de diferencia en VCL, VAP, VSL, ALH y BCF no ofrece la oportunidad de afirmar una mejora  
general del movimiento. En particular una diferencia en la linealidad no indica ningún cambio en  
la capacidad de fertilización.  
En Ecuador, Mancheno Herrera et al. una mejor conservación estructural para las dosis de 0.5 y  
1 mg en el semen de carneros Pelibuey y Blackbelly (7). Por su parte, el vínculo entre los  
resultados positivos a dosis bajas es interesante pero la composición racial diferente y el método  
de dosificación influyen directamente en la comparabilidad entre estas investigaciones.  
CONCLUSIONES  
Bajo las condiciones experimentales, la dosis de 1 mg de CLC por cada 50 × 10⁶ espermatozoides  
da el mejor desempeño en la prueba HOST, con un 78,00 % frente al 63,80 % en el control. La  
mayor viabilidad media se registra con 1 mg, según la evaluación con eosina–nigrosina, y esto  
data que sea estadísticamente mejor que todos los otros tratamientos. Aquellos resultados  
permiten seguir investigando la dosis por su buena respuesta en la preservación de la membrana  
espermática. Sin embargo, esta dosis aún no puede considerarse la más adecuada para la calidad  
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EFECTO DE LA SUPLEMENTACIÓN CON NANOCOMPLEJOS DE COLESTEROL-METIL-Β-CICLODEXTRINA EN LA CALIDAD SEMINAL  
OVINA  
total del semen. Por otra parte, la dosis de 3 mg tiene el mayor porcentaje de células con  
marcación mitocondrial detectable, del 86,60 %. Esto no demuestra una producción de ATP  
aumentada ni una mejor capacidad de fertilización. En lo que se refiere a la motilidad, no se  
identificaron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos en las categorías de  
motilidad ni en los parámetros VCL, VAP, VSL, ALH y BCF. Al contrario, el grupo control tiene  
valores significativamente más altos de LIN y STR que los tratamientos de 1 y 3 mg. Por lo tanto,  
el efecto del CLC depende del parámetro que se esté analizando.  
Finalmente, en el análisis de cinco colectas de un carnero Katahdin, los resultados nos brindan  
una aproximación inicial, la cual debe ser validada por estudios posteriores en otros  
reproductores. Además, la disparidad entre las formulaciones nos impide atribuir las diferencias  
frente al tratamiento de control exclusivamente al CLC y no permite concluir que este sustituya  
la yema de huevo de manera igual de eficaz. Para avanzar en el estudio del CLC será necesario  
contar con más animales, realizar estudios comparativos que nos ayuden a diferenciar los efectos  
de ambos componentes y realizar pruebas de fertilidad.  
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