EFECTO DE LA ADICIÓN DE ANTIOXIDANTES ANTE EL ESTRÉS OXIDATIVO DE ESPERMATOZOIDES BOVINOS CRIOPRESERVADOS EN LA PROVINCIA DE MORONA SANTIAGO

Resumen

La criopreservación del semen bovino es una técnica muy utilizada en la reproducción y el mejoramiento genético; sin embargo, el proceso de congelación y descongelación puede afectar a los espermatozoides debido al estrés oxidativo, lo que puede limitar su fertilidad. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de la adición de antioxidantes (ácido ascórbico y resveratrol) sobre el estrés oxidativo en espermatozoides bovinos criopreservados en la provincia de Morona Santiago, Ecuador. Se utilizó un diseño experimental completamente al azar con tres tratamientos: control, ácido ascórbico y resveratrol y seis repeticiones por cada uno. El semen fue colectado de un toro Simmental mediante vagina artificial, diluido con Triladyl, suplementado con antioxidantes (4 mg/ml) y criopreservado en nitrógeno líquido. Posteriormente, se evaluaron los parámetros cinéticos mediante el sistema CASA, la integridad de la membrana plasmática y acrosómica mediante tinción fluorescente (PI/PNA-FITC) y la integridad de la cromatina mediante tinción con naranja de acridina. Se aplicó la prueba de Tukey (p < 0,05) para la separación de medias. Los resultados evidenciaron que el tratamiento control presentó valores significativamente superiores en motilidad total (56,83%), motilidad progresiva (41,52%), velocidad media del trayecto (37,85 µm/s) y velocidad en línea recta (28,20 µm/s), en comparación con los tratamientos con antioxidantes, los cuales redujeron significativamente estos parámetros. No obstante, el resveratrol mostró un efecto protector sobre la integridad estructural, alcanzando el mayor porcentaje de cromatina intacta (96,72%) y valores de integridad de membrana similares al control, mientras que el ácido ascórbico presentó menores porcentajes de integridad estructural. Se concluye que, en las condiciones evaluadas, la adición de antioxidantes no mejoró la cinética espermática post-criopreservación, pero el resveratrol contribuyó a preservar la integridad de la cromatina y la membrana plasmática, lo que sugiere su potencial aplicación en la protección estructural del semen bovino criopreservado.

ABSTRACT

Cryopreservation of bovine semen is a widely used technique in reproduction and genetic improvement; however, the freezing and thawing process can affect sperm due to oxidative stress, which can limit their fertility. The objective of this study was to evaluate the effect of adding antioxidants (ascorbic acid and resveratrol) on oxidative stress in cryopreserved bovine spermatozoa in the province of Morona Santiago, Ecuador. A completely randomized experimental design with three treatments: control, ascorbic acid, and resveratrol were used, with six replicates per treatment. Semen was collected from a Simmental bull using an artificial vagina, diluted with Triladyl, supplemented with antioxidants (4 mg/ml), and cryopreserved in liquid nitrogen. Subsequently, kinetic parameters were evaluated using the CASA system, plasma and acrosomal membrane integrity was assessed using fluorescent staining (PI/PNA-FITC), and chromatin integrity was assessed using acridine orange staining. Tukey's test (p < 0.05) was used for mean separation. The results showed that the control treatment exhibited significantly higher values for total motility (56.83%), progressive motility (41.52%), mean travel speed (37.85 µm/s), and straight-line speed (28.20 µm/s) compared to the antioxidant treatments, which significantly reduced these parameters. However, resveratrol showed a protective effect on structural integrity, achieving the highest percentage of intact chromatin (96.72%) and membrane integrity values similar to the control, while ascorbic acid showed lower percentages of structural integrity. It is concluded that, under the evaluated conditions, the addition of antioxidants did not improve sperm kinetics post-cryopreservation, but resveratrol contributed to preserving chromatin and plasma membrane integrity, suggesting its potential application in the structural protection of cryopreserved bovine semen.